薄層色譜法(thin layer chromatography簡寫TLC)是一種物理化學的分離技術，常用于藥物的分離與分析。現(xiàn)對此方法的分析步驟及留意事項提點建議。 完成TLC分析通常需經制板、點樣、展開、檢出4步操縱。     ⑴制板  在一平面支持物(通常為玻璃)上，均勻地涂制硅膠、氧化鋁或其他吸附劑薄層、樣品的分離、檢測就在此薄層色譜板上進行。  一般選用適當規(guī)格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄層板規(guī)格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。稱取適量硅膠，加進0.2％～0.5%羧甲基纖維素鈉溶液（CMC-Na），充分攪拌均勻，進行制板。一般來說10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅膠/塊；硅膠與羧甲基纖維素鈉的比例一般為1：2～1：4。制好的玻璃板放于水平臺上，留意防塵。在空氣中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放涼，并將其放于紫外光燈(254nm)下檢視，薄層板應無花斑、水印，方可備用。     ⑵點樣  用微量進樣器進行點樣。點樣前，先用鉛筆在層析上距末端lcm 處輕輕畫一橫線，然后用毛細管吸取樣液在橫線上輕輕點樣，假如要重新點樣，一定要等前一次點樣殘余的溶劑揮發(fā)后再點樣，以免點樣斑點過大。一般斑點直徑大于2mm，不宜超過5mm.底線距基線1～2．5cm，點間間隔為lcm左右，樣點與玻璃邊沿間隔至少lcm，為防止邊沿效應，可將薄層板兩邊刮往1～2cm，再進行點樣。     ⑶展開  將點了樣的薄層板放在盛在有展開劑的展開槽中，由于毛細管作用，展開溶劑在薄層板上緩慢前進，前進至一定間隔后，取出薄層板，樣品組分固移動速度不同而彼此分離。  ① 展開室應預飽和。為達到飽和效果，可在室中加進足夠量的展開劑；或者在壁上貼兩條與室一樣高、  寬的濾紙條，一端浸進展開劑中，密封室頂的蓋。  ② 展開劑一般為兩種以上互溶的有機溶劑，并且臨用時新配為宜。 ③ 薄層板點樣后，應待溶劑揮發(fā)完，再放人展開室中展開。  ④ 展開應密閉，展距一般為8～15cm。薄層板放進展開室時，展開劑不能沒過樣點。一般情況下，展開劑浸進薄層下真?zhèn)€高度不宜超過0.5cm。 ⑤ 展開劑每次展開后，都需要更換，不能重復使用。  ⑥ 展開后的薄層板用適當的方法，使溶劑揮發(fā)，然后進行檢視。  ⑦ Rf值一般控制在0.3～0.8，當Rf值很大或很小時，應適當改變活動相的比例。     ⑷ 斑點的檢出  展開后的薄層板經過干燥后，常用紫外光燈照射或用顯色劑顯色檢出斑點。對于無色組分，在用顯色劑時，顯色劑噴灑要均勻，量要適度。紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出效果就越好。  展開分離后，化合物在薄層板上的位置用比移值(Rf值)來表示。化合物斑點中心至原點的間隔與溶劑前沿至原點的間隔的比值就是該化合物的Rf值。